Нажмите "Enter" для пропуска содержимого

20K: Kush Lovers — 20k скачать mp3 песню и слушать онлайн

Содержание

Газовый настенный котел NAVIEN ACE-203K

Настенные двухконтурные газовые котлы Navien Ace-20k White полностью адаптированны к стабильной безотказной работе, как в жёстких условиях русского климата, так и в условиях повседневной действительности. Настенный газовый котел Navien Ace 20K White даже при колебаниях напряжения в сети от установленного 220В на величину +/-30%, за счёт включения специального механизма, управляемого микропроцессором SMPS (Switched-Mode Power Supply), котел будет работать стабильно без сбоев, что предотвращает поломки в системе электрики и автоматики, и увеличивает его срок службы. Котлу Navien Ace 20K White не страшны морозы, он имеет систему защиты от замерзания. Не помеха для работы газового котла Navien Ace 20K White и низкое давление газа (до 4мБар) и воды (до 0,1 Бар), В связи с этим, такие котлы рекомендуется использовать в сетях с низким давлением газа и воды, и в многоэтажных зданиях, где многие другие модели просто бесполезны. Для продления срока эксплуатации и защиты от коррозии, теплообменник изготавливается из меди. За счёт применения датчика давления воздуха APS, достигается практически полное сгорание газа, что способствует его экономии. Выносная автоматика управления (на русском языке) полностью адаптируется к отапливаемому помещению, поддерживая в нём любую комфортную для Вас температуру, позволяя в то же время экономно расходовать газ.

 

Описание отопительного котла NAVIEN Ace-20K Turbo 

Источник энергии

газ

Установка

настенный

Тип

двухконтурный (отопление и нагрев)

Площадь обогрева

200 м2
Технические х-ки  

Полезная мощность

20 кВт

Камера сгорания

закрытая (турбированный)

Питание

однофазное (220 В)

Потребляемая мощность

150 Вт

Мин. t системы отопления

40 °С

Макс. t системы отопления

80 °С

Макс. давление в контуре отопления

3 бар

Макс. давление в контуре ГВС

8 бар
Потребительские х-ки  

Мин. t горячей воды

40

Макс. t горячей воды

80

Производительность (Δt=25°C)

12.4 л/мин

Производительность (Δt=35°C)

8.1 л/мин

Выносной блок управления

+

Летний режим работы

+

Циркуляционный насос

+
Характеристики котла  

КПД

92 %

Номинальное давление газа на входе

13 мбар

Макс. расход газа

2.04 м3/час

Диаметр дымохода

75/70 мм / 80/80 /

Количество теплообменников: 2 шт.

Газовый котел Navien DELUXE Comfort 20K, двухконтурный, 20 кВт — СантехБомба

Условия акции: Акция в интернет-магазине «СантехБомба» — скидка 10% на трубы и фитинги, при покупке отопительных котлов Navien.

Deluxe Comfrot — Настенный газовый двухконтурный котел с закрытой камерой сгорания.

Котел имеет семиступенчатую защиту от сбоев в работе и автоматическую функцию отключения при нарушении работы или отсутствии тяги в дымоходе. Главное достоинство новинки заключается в том, что он обеспечивает экономию энергии за счет модулированной системы турбонаддува. Вентилятор турбонаддува изменяет скорость вращения по сигналу, поступающему от датчика давления воздуха Air Pressure System (APS). 

Изменена конструкция внутренних элементов, что значительно упрощает процесс технического обслуживания узлов: вторичный теплообменник, трехходовой клапан, другие части группы.

КОТЕЛ ИМЕЕТ КОАКСИАЛЬНОЕ ПОДКЛЮЧЕНИЕ ДЫМОХОДА

Deluxe C  предназначен для штатного присоединения к коаксиальной системе дымоудаления с помощью стандартных коаксиальных комплектов подключения 60/100.

  • Компактный

  • Бесшумная работа (40 дб)

  • Гарантия 2 года

  • Мгновенный нагрев воды 13,8 л/мин

  • Два раздельных теплообменника устойчивых к коррозии

  • Более мощный циркуляционный насос, высота — 5,2 метра, напор -30 л/мин.

  • Подключение всех труб соответствует ранним моделям Deluxe.

КОТЛЫ NAVIEN МАКСИМАЛЬНО АДАПТИРОВАНЫ К РОССИЙСКИМ УСЛОВИЯМ ЭКСПЛУАТАЦИИ

Все котлы Navien оснащены чипами SMPC (Switched-Mode Power Supply).

Чип позволяет котлу работать в диапазоне +/- 30% от напряжения 230 вольт.

Котел будет работать даже во время максимальных нагрузок — при падении напряжения в электросетях!

Котел включается при минимальном давлении газа от 4 мбара.

Котел работает при минимальном давлении холодной воды (от ~0,1 бар)

ВЫНОСНОЙ ПУЛЬТ (ТЕРМОСТАТ) В КОМПЛЕКТЕ С КОТЛОМ

Выносной, русифицированный пульт управления с подсветкой и большим жидкокристаллическим дисплеем позволяет экономно расходовать газ, сокращает расходы на отопление до 23% и постоянно поддерживает комфортную температуру в доме!

Выносной пульт с функцией термостата к комплекте поставки!

Страница не найдена / Тактико-экипировочный центр ПЕРЕСВЕТ

К сожалению, по вашему запросу ничего не найдено. Пожалуйста, убедитесь, что запрос введен корректно или переформулируйте его.

Пожалуйста, введите более двух символов

Все результаты поиска

Платина, lil krystalll — £20k текст песни

Пр-р, я
Кольца на моих…
Пр-р
РНБ КЛУБ, все на блоке
Опиаты круг на блоке
10к в одной котлете
10к во второй котлете
20к досчитаем вместе
Цацки на руках, она моя леди (baby)
10к всё одной котлете
10к во второй котлете
20к посчитаем вместе
Цацки на руках (о, блять), она моя леди (baby)
Кольца на моих руках, как Марио
Ускоритель на ногах, упали броу
Двадцать жизней, я их всех потрачу, hoe (hoe-hoe)
Съем таблетку, плюну ей на pussy, воу (pussy)
Ты, бля, в моём вкусе, детка, это грязь (гряз-з-з-зь)
Ты одна на тусе, тут так много groupies
Все они не курят, всем им по шестнадцать
Они пенис дуют, это флоу мой, brother (пр-пр)
Трахнул твою суку (трахнул), трахнул твою группу (группу)
Я курю большие бошки, чуешь разницу?
Мои яйца, бля, висят, тут она влюбилась
Ей нравится артист, она любит кисю
Кольца на моих руках как Марио
10к в одной котлете
10к во второй котлете
20к досчитаем вместе
Цацки на руках, она моя леди (baby)
10к всё одной котлете
10к во второй котлете
20к посчитаем вместе
Цацки на руках (о, блять), она моя леди (baby)
Бугимейн на схемах, нужно делать деньги (деньги)
РНБ на схемах, не нужны проблемы (пр-р)
Пушки на руках, пушки на прицеле
Я стрелял на глаз и убил все цели (пр-пр)
Брат, мы курим газ (газ), они хотят нас (нас)
Много говорят (да) и всегда пиздят
Трахнул твою блядь, забрал твою подругу (ху)
Опиаты круг на блоке, мы сидим на кухне (м-м)
Жирный боинг идёт в ротации по кругу (what?)
Мой братан подаст воды, он меня любит (а)
Ты пиздишь, что ты, бля, тру, но ты не тру, да
Называешь меня другом, ты не друг, да (не-нет)
За это мы забрали твою суку, да (да)
Я курю траву, ведь нам так можно, да
Я курю, пока не станет плохо (и мне похуй), воу, воу, эй
10к в одной котлете
10к во второй котлете
20к досчитаем вместе
Цацки на руках, она моя леди (baby)
10к всё одной котлете
10к во второй котлете
20к посчитаем вместе
Цацки на руках (о, блять), она моя леди (baby)

Чемпионат USATF на 20 км, представленный Toyota

Призовой фонд предназначен только для граждан США,
согласно правилам чемпионата USATF.

Место Призовой фонд
1-й 9000 долларов
2-й 4000 долларов
3-й 2000 долларов
4-й 1200 долларов
5-й 1000 долларов
6-й 600 долларов
7-й 500 долларов
8-й 400 долларов
9-й 200 долларов
10 100 долларов
Мужчины 19 000 долларов
Женщины $ 19 000

ВСЕГО 38 000 долларов США
Запись курса — 1000 долларов США
 
Новый взгляд на участие с освещением событий сообщества!
 
ИзбранноеОбзоры женских гонок — Чемпионат USATF на 20 км, представленный Toyota 2021 FeaturedMen’s Race Highlights — Чемпионат USATF на 20 км, представленный Toyota 2021
 

пожар увеличился до 20К, экипажи борются с ветром Красного флага

Бригады во Флагстаффе продолжают бороться с быстро распространяющимся туннельным огнем к северо-востоку от города.Чиновники пожарной охраны говорят, что в среду пожар увеличился более чем на 3000 акров, в результате чего общая площадь сожженных площадей достигла почти 20 000. Сегодня утром пожарные сообщат о том, как вел себя пожар в течение ночи.

В среду бригады работали при ветре Красного флага и добились определенных успехов на западном краю пожара, где им удалось ограничить его широкое распространение.

Бригады продолжали охлаждать горячие точки и работали над тушением огня за пределами участков Timberline Estates и Wupatki Trail.Они столкнулись с утечкой природного газа из некоторых фундаментов, что добавило дополнительный риск к действиям по тушению.

В среду прибыла следственно-оперативная группа, чтобы начать поиск источника возгорания и причины пожара.

Вчера сильный ветер снова ограничил возможности авиации по поддержке пожаротушения. Ожидается, что в четверг и пятницу погода станет более ветреной с порывами до 50 миль в час.

Сотрудники пожарной охраны напоминают общественности, что частным дронам не разрешается летать в районе пожара и вокруг него.Если его заметят, это означает, что все вспомогательные самолеты должны быть заземлены в целях безопасности.

По оценкам офиса шерифа округа Коконино, в результате туннельного пожара на данный момент сгорело около 25 строений. Дополнительная информация станет доступной, когда аварийно-спасательные службы и пожарные смогут получить доступ к окрестностям для точного подсчета того, сколько и какие постройки сгорели.

Округ Коконино создал Центр вызова пожарных в туннелях для эвакуированных по телефону 928-679-8525. США

Шоссе 89 остается закрытым с 425-го по 435-й километр и, вероятно, будет закрыто в течение следующих нескольких дней.

Текущие эвакуации остаются в силе, как и местное чрезвычайное положение.

Сотни пожарных и противопожарных ресурсов работают.

Pact собрал более 20 тысяч фунтов трудноперерабатываемой упаковки для косметики


22 апреля 2022 года — «День Земли», но Pact Collective говорит: «Каждый день — наш День Земли!»

Компания Pact Collective, основанная совместно Credo Beauty и MOB Beauty, является «мозговым центром» индустрии красоты по вопросам устойчивого развития упаковки.Сегодня некоммерческая организация отмечает свою первую годовщину.

«Коллектив силен, потому что у нас есть представители всей отрасли, которые собрались вместе, чтобы создать некоммерческое решение по переработке», — говорит Виктор Казале, соучредитель Pact и генеральный директор MOB Beauty. «Pact принесет столь необходимые инклюзивность и прозрачность систем косметической упаковки — от дизайна до окончания срока службы», — добавляет он.

Членами Pact являются бренды косметики, поставщики упаковки, розничные продавцы и другие некоммерческие союзники, которые помогают индустрии упаковки для красоты перейти от дизайна, который в конечном итоге оказывается на свалке, к дизайну, ориентированному на цикличность.Программа возврата Pact является первой в истории исключительно косметической упаковкой.

Индустрия красоты ежегодно производит около 120 миллиардов косметических упаковок.

Многие косметические бренды по-прежнему используют первичный пластик, хотя PCR и другие материалы представляют собой более экологичные альтернативы. Кроме того, до сих пор существует множество типов косметических упаковок, которые не подлежат вторичной переработке в муниципальных программах утилизации. Коллектив

Pact Collective был создан из заботы о воздействии косметической упаковки на окружающую среду и создал способ ее сбора.Но он также направлен на то, чтобы способствовать дальнейшему обсуждению экологичной упаковки в качестве платформы, на которой участники могут обмениваться ресурсами.

Миа Дэвис, соучредитель Pact и вице-президент Credo по устойчивому развитию и влиянию, говорит:

«Мы основали Pact, чтобы взять на себя ответственность за влияние косметической упаковки на планету. Программа сбора — это один из инструментов в нашем наборе инструментов. Еще большая работа заключается в том, чтобы делиться точной и правдивой информацией с заинтересованными сторонами, чтобы вместе мы изменили дизайн упаковки и помогли каждому сделать выбор в пользу более экологичных материалов.»

Коллектив Пакта теперь насчитывает 100 членов, и их число составляет 90 183.

Pact празднует свой первый день рождения и 100-летнюю участницу Victoria Beckham Beauty.

«Мы очень рады присоединиться к Pact, организации, которая объединяет нас, чтобы изменить статус-кво», — говорит Виктория Бекхэм, основатель Victoria Beckham Beauty. «Большинство отходов косметической упаковки вывозится на свалки, сжигается или выбрасывается, загрязняя населенные пункты и водоемы. Мы должны работать лучше».

Beautycounter, Kendo и ILIA также недавно присоединились к Pact и обязались повысить экологичность своей упаковки.

Грегг Ренфрю, основатель и исполнительный директор Beautycounter, говорит:

«В 2020 году мы поставили перед собой амбициозную цель — к 2025 году сделать упаковку на 100 % экологичной, и я горжусь тем, что наше партнерство с Pact — это еще один способ для нас продолжать оказывать влияние и продвигать индустрию красоты вперед».

Renfrew добавляет: «Я основал Beautycounter, потому что верю в чистую красоту и в то, что мы должны делать лучше как людей, так и планету».

Pact стремится решить проблему, трудно перерабатываемую

Трудноперерабатываемая упаковка настолько распространена в индустрии красоты, что Pact запустила первую в истории программу возврата упаковки, предназначенной только для красоты, в День Земли 2021 года.

С момента запуска программы Pact собрала более 20 000 фунтов трудноперерабатываемой упаковки для косметики. В этом году Pact планирует утроить объем собираемых материалов.

В магазинах розничной торговли и других местах по всей Северной Америке установлено 180 контейнеров для сбора Pact, включая 89 магазинов в Гудзоновом заливе в Канаде. Потребители могут выбрасывать в мусорные баки упаковки для косметики, которые трудно перерабатывать.

Pact советует потребителям по возможности продолжать утилизацию, используя программы на обочине, и обращаться к рекомендациям на своем веб-сайте, прежде чем использовать свои мусорные баки.

Что такое трудно перерабатываемая упаковка?

Любой пластиковый предмет размером меньше стакана для йогурта считается трудно перерабатываемым. Что касается красоты, к ним относятся отжимные трубки, насосы, колпачки и другие компоненты, которые вряд ли будут переработаны в программах для тротуаров.

Но существует четкое различие между упаковкой, которую трудно переработать, и упаковкой, которая вряд ли будет переработана, и, к сожалению, некоторые виды упаковки все равно должны отправляться в мусорные баки. Миссия Pact состоит в том, чтобы работать с производителями и поставщиками упаковки над «проектированием безотходности» и стремится помочь решить эту проблему.

Что Pact делает с трудно перерабатываемой упаковкой?

Pact отправляет свою трудно перерабатываемую упаковку, собранную из своих мусорных баков, партнеру по переработке, где упаковка сортируется, а затем перерабатывается, когда это возможно.

Если упаковка не может быть переработана механически из-за смешанных материалов или загрязнения, она направляется на химическую переработку или на переработку отходов в энергию.

Пакт говорит, что символ преследующих стрел вводит в заблуждение

Определение того, какие упаковки можно перерабатывать, является проблемой для потребителей, если не сказать больше, а косметические бренды иногда не до конца понимают разницу.По этой причине образование является частью миссии Pact.

«Несколько брендов сообщили нам, что они действительно не знали, что их упаковка вряд ли будет переработана, — говорит Дэвис. «Некоторые из смешанных материалов были сплавлены вместе, например, украшение из металлической фольги на пластике. Или сжимаемая трубка из разных видов пластика», — объясняет она. «Они купили упаковку с символом «стрелка погони», поэтому предположили, что ее можно переработать. Этот символ вводит в заблуждение», — говорит она.

Дэвис считает, что символ «стрелки в погоне» должен быть запрещен на упаковке, которая вряд ли будет переработана в рамках программ вторичной переработки.«Теперь, когда эти бренды знают лучше, они могут работать лучше», — говорит он. «Они активно выбирают более устойчивые варианты».

В магазинах Credo Beauty появились контейнеры для пактов

Credo Beauty, розничный продавец чистой косметики и соучредитель Pact Collective, стремится помочь планете с помощью Руководства по устойчивой упаковке, которое было представлено в 2020 году. одноразовые предметы, первичный пластик и материалы, не подлежащие вторичной переработке.

Первая веха в июне 2021 года ознаменовала отказ от всех одноразовых косметических средств, таких как салфетки для макияжа, тканевые маски и лечебные подушечки. «Мы также отказались от нашей программы отбора проб, потому что эти маленькие пакеты никогда не будут перерабатываться», — говорит Дэвис.

Теперь у Credo есть контейнеры для сбора Pact во всех десяти магазинах.

Что дальше для Pact Collective?

Дэвис говорит, что уже видит положительное влияние, которое Pact оказывает на индустрию красоты. «Мы собираем заинтересованные стороны для изучения и обмена информацией, а также для коллективного поднятия планки в области упаковки.”

Pact провел несколько вебинаров, на которых участники поделились передовым опытом и устранили проблемы. «Мы также представили новый инструмент «Экологичная упаковка», который поможет командам сделать лучший выбор упаковки в режиме реального времени, — говорит Дэвис.

Она добавляет: «Мы призываем всех наших участников — на самом деле всю отрасль — стремиться к тому, чтобы упаковка не отправлялась на свалку».

Узнайте больше о Pact Collective и о том, как вы можете присоединиться к движению за экологичную упаковку.

Фото выше из Instagram @Pact_Collective

Yield Guild Games достигла рубежа в 20 тысяч стипендий Axie Infinity P2E другие игры, основанные на принципе «играй, чтобы заработать» (P2E).

Yield Guild Games сообщила о 20 700 уникальных ученых в феврале, что на 8 500% больше, чем в том же месяце прошлого года, когда их было всего 241. объявление передано Cointelegraph.

Стипендии «Играй, чтобы заработать» позволяют новым игрокам брать у гильдии невзаимозаменяемые токены Axie (NFT). Затем их внутриигровой доход делится между игроком, менеджером сообщества и децентрализованной автономной организацией YGG или DAO.

Колин Голтра, глобальный главный операционный директор YGG, сказал Cointelegraph:

«Это только первая из многих вех, которых мы хотим достичь для YGG. Мы действительно увеличили организационные инвестиции в нашу функцию «Game Ops», которая, по сути, является мостом между играми, с которыми мы сотрудничаем, и нашим сообществом членов гильдии».

YGG сообщила, что в феврале ученые собрали более 26,4 млн Smooth Love Potion (SLP), нативного токена для Axie Infinity.Эта цифра на 57% больше, чем в январе.

Он добавил, что более 18,4 миллиона SLP (на сумму около 360 000 долларов США на конец февраля), или 70% от общей суммы, было получено учеными, 20% досталось менеджеру по стипендиям и 10% Гильдии.

Несмотря на падение цен на SLP, спрос на стипендии YGG сохраняется. По данным CoinGecko, SLP в настоящее время торгуется на уровне около 0,018 доллара, что более чем на 95% ниже исторического максимума июля 2021 года в 0,40 доллара.

YGG — это децентрализованное сообщество геймеров, играющих и зарабатывающих деньги. YGG Pilipinas — это локализованная организация, предназначенная для геймеров на Филиппинах, а также YGG subDAO, базирующиеся в Юго-Восточной Азии, Индии, Латинской Америке и Бразилии. Он работает в нескольких играх, инвестируя в приносящие доход внутриигровые невзаимозаменяемые токены (NFT), которые выдаются игрокам. В июне 2021 года компания обеспечила раунд финансирования в размере 4 миллионов долларов США для инвестирования в NFT, и было проведено три раунда финансирования и публичная продажа на общую сумму 22 доллара США.4 миллиона.

Связанные: Какие игры для заработка лучше, чем Axie Infinity?

Помимо стипендий Axie, YGG запустила аналогичные поощрения для киберпанк-игры CyBall, посвященной футболу. 1000 стипендий были быстро раскуплены, и теперь программа заполнена, но YGG заявили, что вскоре на их канале Discord будет предложено больше.

В феврале Cointelegraph сообщил, что YGG запустила новый блокчейн Proof-of-Stake, ориентированный на игры, под названием Oasys.

Великобритания регистрирует менее 20 000 ежедневных случаев заболевания второй день подряд и 284 случая смерти

Великобритания регистрирует менее 20 000 ежедневных случаев заболевания Covid второй день подряд, при этом последняя волна все еще уверенно отступает.

Руководители Агентства по безопасности здравоохранения Великобритании зафиксировали еще 19 795 положительных результатов за последние 24 часа. А сегодня зарегистрировано еще 284 летальных исхода от Covid.

Цифры нельзя сравнивать с прошлой неделей, потому что в выходные, посвященные пасхальным праздникам, не сообщалось ни одного ежедневного подсчета.Тем не менее, семидневное скользящее среднее число инфекций снизилось на десятую часть, а смертность увеличилась на одну пятую.

Эксперты говорят, что ежедневный подсчет заражений теперь «совершенно не имеет значения», потому что для подавляющего большинства людей бесплатные тесты отменены.

Это происходит из-за того, что отдельные данные Управления национальной статистики (ONS) показывают, что 38,5 миллионов человек заразились в какой-то момент в период с 27 апреля 2020 года по 11 февраля 2022 года — около семи из 10. Это первая официальная цифра. был поставлен на общую заболеваемость Covid после ожесточенных дебатов на протяжении всей пандемии.

Другие данные, опубликованные сегодня статистиками, показывают, что за неделю, закончившуюся 16 апреля, в Англии было инфицировано 3,2 миллиона человек. снизился примерно на 15 процентов за неделю, что говорит о том, что вспышка в стране все еще сокращается.

Сообщалось, что случаи заражения снижались во всех возрастных группах и во всех регионах Англии.

По оценкам Управления национальной статистики, 38.5 миллионов человек в Англии были инфицированы в период с апреля 2020 года по февраль 2022 года, что эквивалентно 70,7%

Отдельные правительственные данные показывают, что только трое из 10 человек в Великобритании переболели Covid. Но эта цифра основана на количестве людей, которые дали положительный результат и сообщили о своем подтвержденном заражении на веб-сайте правительства, в отличие от опроса ONS, который берет мазки случайной выборки британцев для оценки уровня заражения в Великобритании. Данные Агентства по безопасности здравоохранения Великобритании показывают 30.К среде 9% жителей Англии дали положительный результат на вирус. Между тем, 32,8% жителей Шотландии и 34,9% жителей Северной Ирландии получили положительный результат. Данные недоступны для Уэльса

Оценки для остальной части Великобритании гораздо менее надежны, потому что ONS начало собирать данные только летом в Уэльсе и Северной Ирландии, а еще позже в Шотландии

Вспышка Covid в Англии продолжает снижаться , Данные ONS показывают, что

случаев заболевания Covid в Англии на прошлой неделе продолжали снижаться, при этом каждый 17-й инфицирован, согласно исследованию эпиднадзора в стране.

Еженедельное исследование инфекций Управления национальной статистики (ONS) показывает, что 3,2 миллиона человек в Англии были инфицированы за неделю до 16 апреля.

Еженедельный отчет ONS является самым надежным индикатором текущей ситуации с Covid, теперь бесплатные тесты отменены для подавляющего большинства британцев.

Он берет случайную выборку около 100 000 человек и не полагается на людей с симптомами, что может исказить результаты.

По оценкам ONS, на прошлой неделе в Англии было инфицировано 3 218 700 человек, что составляет одного из 17 человек или 5,9 процента населения.

И показатели снизились в других странах Великобритании: 281 400 (5,4%) инфицированных в Шотландии, 198 400 (6,5%) носителей вируса в Уэльсе и 65 300 (3,6%) Covid-позитивных в Северной Ирландии.

В Англии уровень инфицирования снизился во всех частях страны, за исключением северо-востока, где тенденция была неопределенной.

И статистики считают, что случаи заболевания падают среди людей всех возрастов в стране.

Данные UKHSA показывают, что 15 832 человека в Англии дали положительный результат на Covid, в то время как в Шотландии было зарегистрировано 3 093 положительных мазка, в Уэльсе обнаружено 163 случая, а в Северной Ирландии зарегистрировано 707 случаев заражения.

Всего 19 795 человек — это второй день подряд, когда количество заражений упало ниже 20 000. 19 482 случая заражения, зарегистрированных вчера, являются самым низким ежедневным показателем, зарегистрированным с 27 июня, когда было зарегистрировано 14 876 официальных случаев.

Но эта метрика стала гораздо менее надежной после того, как для большинства британцев были отменены бесплатные тесты.

Данные о вакцинации показывают, что 92,3% британцев в возрасте 12 лет и старше получили хотя бы одну прививку, в то время как 86,4% получили двойную прививку, а 68% получили ревакцинацию.

Маргарет Кинан, первый человек в мире, получивший одобренный прививку от Covid, сегодня стала одной из 2 миллионов человек, которым до сих пор делали весеннюю ревакцинацию.

По оценкам ONS, семь из десяти человек в Англии переболели Covid в первые два года пандемии.

Оценка основана на результатах более 500 000 взрослых и детей по всей Великобритании за последние два года, которые были выбраны случайным образом и регулярно тестировались методом ПЦР.

В отчете ONS также оценивается, что 1,7 миллиона человек в Уэльсе переболели Covid, или 56 процентов населения, на основе результатов за период с 30 июня 2020 года по 11 февраля 2022 года.

В Северной Ирландии это число составило 1,3 миллиона. , что составляет 72,2% всей территории страны, по данным тестов от 27 июля 2020 года и 11 февраля 2022 года.

Оценка для Шотландии — 2,7 миллиона, или 51,5 процента — наименее надежна, поскольку данные начали собираться только 22 сентября 2020 года. начали собирать данные летом в Уэльсе и Северной Ирландии, а еще позже в Шотландии.

Участники были в возрасте от двух лет и старше, жили в частных домах и регулярно проходили тестирование в течение всего времени участия в исследовании.

ONS заявило, что данные по каждой стране Великобритании нельзя напрямую сравнивать друг с другом, поскольку они относятся к разным периодам времени.

Г-н Кук, заместитель директора еженедельного исследования инфекции Covid, сказал: «Сегодняшний выпуск является ценной частью головоломки для понимания воздействия пандемии на Великобританию.

‘Этот анализ был бы невозможен без постоянного участия более полумиллиона человек, принявших участие в нем за последние два года.

«Мы продолжим тесно сотрудничать с нашими академическими партнерами, чтобы лучше понять COVID-19 и его влияние на общество».

Выяснение истинной распространенности Covid было сложной задачей для ученых, поскольку в начале пандемии тестирование проводилось неоднородно, а повторное заражение становилось все более распространенным явлением.

Отдельная команда, отслеживающая вспышку в Кембриджском университете, подсчитала, что к февралю 51,8% людей в Англии были инфицированы Covid.

Данные панели управления правительства, которые основаны исключительно на людях, пришедших на тестирование, а не на случайную выборку, указывают на то, что только трое из 10 человек в Великобритании переболели Covid.

Но даже более высокий процент ONS для Англии, вероятно, будет заниженным из-за огромного количества инфекций, упущенных из его анализа.

Сюда не входят решающие месяцы в феврале и марте 2020 года, когда началась первая волна, вызвавшая первую национальную изоляцию.

Ученые тогда подсчитали, что до 100 000 человек заражались этой болезнью в день на пике первой вспышки, но истинная распространенность вируса остается неизвестной из-за отсутствия тестирования в то время.

Анализ также не включает март и большую часть апреля этого года, когда считалось, что миллионы людей заражаются вирусом каждую неделю.

Статистики ONS подсчитали, что за неделю до 16 апреля заразились 3,2 миллиона человек. Эта цифра, основанная на мазках у 120 000 человек, уменьшилась на 14.7 процентов за неделю, что свидетельствует о том, что вспышка все еще сокращается

По оценкам ONS, на прошлой неделе в Англии было инфицировано 3 218 700 человек, что соответствует одному из 17 человек или 5,9 процента населения. И показатели снизились в других странах Великобритании: 281 400 (5,4%) инфицированных в Шотландии, 198 400 (6,5%) носителей вируса в Уэльсе и 65 300 (3,6%) Covid-позитивных в Северной Ирландии

В Англии, уровень инфицирования снизился во всех частях страны, за исключением северо-востока, где тенденция была неопределенной.По оценкам ONS, 7 процентов людей на северо-востоке были инфицированы, за ними следуют Йоркшир и Хамбер (6,8 процента), Ист-Мидлендс (6,6 процента) и Уэст-Мидлендс (6,3 процента). Случаи Covid были ниже, чем в среднем по стране, на юго-западе (5,7%), юго-востоке (5,7%), востоке (5,6%), северо-западе (5,4%) и Лондоне (5,3%)

И статистики считают, что число случаев заболевания в Англии снижается среди людей всех возрастов. Самый высокий уровень заболеваемости был среди лиц старше 70 лет (6.6 процентов), затем следуют лица в возрасте от 50 до 69 лет (6,2 процента), от 25 до 34 лет (6 процентов), от 35 до 49 лет (5,7 процента). Самые низкие показатели были среди детей в возрасте от 2 до 11 лет (4,7%), от 16 до 24 лет (4,4%) и от 12 до 15 лет (2,8%). рекорд 505 дней до смерти в самом продолжительном известном случае инфекции, ученые раскрывают

Пациент Covid боролся с одной и той же инфекцией в течение почти 18 месяцев, что считается самым продолжительным известным непрерывным случаем в мире.

Ученые говорят, что неопознанный британский пациент, который в конце концов умер, имел серьезный иммунодефицит.

Медики не сообщили, в каком состоянии был пациент, сколько ему было лет и были ли они привиты.

Но они изучили девять разных пациентов с ослабленной иммунной системой из-за трансплантации органов, ВИЧ и рака.

Исследователи из Королевского колледжа Лондона и Фонда NHS Гая и Сент-Томаса раскрыли эти случаи.

Четыре пациента умерли, двоим потребовалась терапия антителами и противовирусные препараты, чтобы избавиться от инфекции.Двое в конечном итоге выздоровели без лечения.

Девятый пациент заражен тем же приступом Covid, который они заразились 412 дней назад.

Если им не удастся избавиться от вируса при следующем осмотре, они затмят 505-дневный рекорд, установленный другим пациентом.

В общей сложности девять пациентов боролись с Covid в среднем 72 дня до выздоровления, смерти или окончания исследования.

Данные Агентства безопасности здравоохранения Великобритании, отображаемые на панели инструментов правительства Covid, показывают 30.К среде 9% жителей Англии дали положительный результат на вирус.

Но эта цифра основана на количестве людей, которые дали положительный результат и сообщили о своем подтвержденном заражении на веб-сайте правительства, в отличие от опроса ONS, который берет мазки случайной выборки британцев для оценки уровня заражения по всей Великобритании.

Тем временем положительный результат был зарегистрирован у 32,8% жителей Шотландии и 34,9% жителей Северной Ирландии. Данные недоступны для Уэльса.

В Соединенном Королевстве Дерри-Сити и Страбейн в Северной Ирландии имели самый высокий уровень подтвержденных случаев заболевания: 38 процентов зарегистрировали их инфекцию.

Северный Ланаркшир (37,7%), Южный Ланаркшир (37,3%), Ренфрушир (37,2%) и Западный Данбартоншир (37,2%) имели следующие самые высокие показатели подтвержденных тестов на коронавирус.

На другом конце шкалы жители Северного Норфолка (21,5%), Оркнейских островов (22,4%), Вестминстера (24%) и Райдейла (24.1 процент) сообщили о наименьшем количестве случаев Covid.

Это происходит из-за того, что сегодня еженедельный обзор инфекций ONS показал, что 3,2 миллиона человек в Англии были инфицированы Covid за неделю до 16 апреля. начало месяца.

Еженедельный отчет ONS является самым надежным индикатором текущей ситуации с Covid, теперь бесплатные тесты отменены для подавляющего большинства британцев.

Он берет случайную выборку около 100 000 человек и не полагается на людей с симптомами, что может исказить результаты.

По оценкам ONS, на прошлой неделе в Англии было инфицировано 3 218 700 человек, что составляет одного из 17 человек или 5,9 процента населения.

И показатели снизились в других странах Великобритании: 281 400 (5,4%) инфицированных в Шотландии, 198 400 (6,5%) носителей вируса в Уэльсе и 65 300 (3,6%) Covid-позитивных в Северной Ирландии.

В Англии уровень инфицирования снизился во всех частях страны, за исключением северо-востока, где тенденция была неопределенной.

По оценкам ONS, 7 процентов людей на северо-востоке были инфицированы, за ними следуют Йоркшир и Хамбер (6,8 процента), Ист-Мидлендс (6,6 процента) и Уэст-Мидлендс (6,3 процента).

случаев Covid были ниже, чем в среднем по стране, на юго-западе (5,7%), юго-востоке (5,7%), востоке (5,6%), северо-западе (5,4%) и Лондоне (5,3%).

И статистики считают, что число случаев падает среди людей всех возрастов в Англии.

Самый высокий уровень заболеваемости был среди лиц старше 70 лет (6.6 процентов), затем следуют лица в возрасте от 50 до 69 лет (6,2 процента), от 25 до 34 лет (6 процентов) и от 35 до 49 лет (5,7 процента).

Самые низкие показатели были среди детей от 2 до 11 лет (4,7%), от 16 до 24 лет (4,4%) и от 12 до 15 лет (2,8%).

Защитное деление митохондрий, индуцированное чувствительным к стрессу белком GJA1-20k

Рецензент №1 (Рекомендации авторам):

Эта группа первоначально обнаружила, что специфичная для кардиомиоцитов сверхэкспрессия укороченной изоформы Cx43 (GJA1-20k) защищает сердце от ишемии/реперфузии у мышей, и это исследование поддерживает их предыдущее исследование, демонстрируя кардиозащитный эффект введения пептида GJA1-20k.Авторы предполагают, что Drp1-независимое деление митохондрий и продукция АФК предвосхищают сердце против тяжелого ишемического стресса. Эта концепция очень интересна и нова, но есть несколько моментов, которые следует пересмотреть.

1. Механизм того, как GJA1-20k индуцирует Drp1-независимое деление посредством накопления актина в митохондриях, неясен. Пожалуйста, определите, что движет делением митохондрий. Это связано с другими ГТФазами, такими как динамин-2, Nature 540, 139-143 (2016). https://дои.орг/10.1038/природа20555?

Мы благодарим рецензента за то, что он поднял этот вопрос, и ценим новизну введения типа митохондриального деления, который не зависит от известных медиаторов деления. Чтобы ответить на вопрос рецензента и выяснить, участвует ли динамин-2 (DNM2) в делении митохондрий с помощью GJA1-20k, для пересмотренной рукописи мы удалили DNM2 и оценили морфологию митохондрий с GJA1-20k или без него. Как видно из исправленного рисунка 2 (дополнение к рисунку 1, панели G – I), нокдаун DNM2 существенно не влияет на общую среднюю площадь митохондрий с присутствием или без присутствия GJA1-20k.Неспособность нокдауна DNM2 повлиять на опосредованное GJA1-20k деление в клетках HEK, которые мы использовали, предполагает, что активность GJA1-20k в митохондриях может быть независимой от DNM2. Ясно, что еще многое предстоит узнать о делении, опосредованном GJA1-20k. GJA1-20k связан с внешней мембраной митохондрий (Basheer et al. , JCI Insight , 2018). Хотя мы не должны исключать другие медиаторы, мы ожидаем, что GJA1-20k является партнером по прямому связыванию и регулятором динамики актина, как показано на рисунках 3D и 3E, и, следовательно, отвечает за организацию актина вокруг митохондриальных телец, индуцируя опосредованное актином событие расщепления. (Рисунок 4).

Пересмотренная рукопись была изменена, чтобы включить указанные выше новые данные (рис. 2 — дополнение к рисунку 1G-I) и обсуждение:

— Раздел результатов

«Помимо DRP1, Dynamin-2 (DNM2) также является GTPase, которая потенциально может регулировать деление митохондрий (Lee, Westrate et al., 2016). Чтобы исследовать возможное участие DNM2, мы выключили DNM2 с помощью siRNA и проанализировали митохондриальную морфологию. В отличие от siDRP1, siDNM2 сам по себе не влиял на морфологию митохондрий (рис. 2 — дополнение к рисунку 1G — I) с GJA1-20k или без него, что свидетельствует об отсутствии участия DNM2 в митохондриальной динамике клеточных линий HEK293.Сообщалось, что DNM2 не обязательно отвечает за деление митохондрий и в других клеточных линиях (Fonseca, Sanchez-Guerrero et al., 2019). Тот факт, что DNM2 не требуется для активности GJA1-20k, указывает на то, что он не является важным кофактором в делении митохондрий, опосредованном GJA1-20k».

— Разделы обсуждения

«Мы также исследовали участие DNM2 в качестве другой ГТФазы в делении митохондрий, но нокдаун DNM2 не смог вызвать достаточное слияние митохондрий или изменить эффекты GJA1-20k (рис. 2 — дополнение к рисунку 1G–I).Следовательно, не похоже, что DNM2 необходим для активности GJA1-20k в делении митохондрий. Помимо актина, в расщеплении митохондрий может участвовать мембрана эндоплазматического ретикулума (ER) (Friedman, Lackner et al., 2011, Tandler, Hoppel et al., 2018). В будущих исследованиях следует рассмотреть вопрос о том, затрагивает ли индуцированное GJA1-20k расположение актинового цитоскелета также и мембрану ER. Учитывая быстроту (менее одной минуты) индуцированного GJA1-20k деления, представляет интерес, как активность деления может быть ограничена в стабильных клетках, особенно в терминально дифференцированных клетках, таких как взрослые кардиомиоциты.

2. Наиболее важным моментом является то, что GJA1-20k вызывает деление митохондрий с небольшим производством АФК и ослабляет производство митохондриальных АФК, вызванное перекисью водорода. Чтобы избежать возможности получения изображения артефакта, им необходимо провести сравнительные эксперименты с клетками, которые имеют фрагментированные митохондрии из-за сверхэкспрессии Drp1 и подавления Mfn1/2 или Opa1.

Мы высоко ценим отличное предложение рецензента. Чтобы решить эту проблему, мы сверхэкспрессировали DRP1 и измерили продукцию АФК при стрессе h3O2.Как и ожидалось (и предсказано рецензентом), сверхэкспрессия DRP1 вызывала фрагментацию митохондрий (новый рисунок 5 — дополнение к рисунку 1F, G). Кроме того, в то время как h3O2 не вызывал увеличения продукции АФК в присутствии GJA1-20k (новый рисунок 5 — дополнение к рисунку 1D, E), h3O2 вызывал увеличение продукции АФК в присутствии сверхэкспрессии DRP1 (новый рисунок 5— дополнение к рисунку 1 H, I). Следовательно, фрагментация митохондрий, вызванная сверхэкспрессией DRP1, более чувствительна к окислительному стрессу и продуцирует большее количество АФК, чем в присутствии GJA1-20k.Эти данные подтверждают наш вывод о том, что GJA1-20k индуцирует защитное (а не вредное) деление митохондрий.

Кроме того, чтобы добавить строгости исследования и решить проблемы сердечной специфичности, мы провели новые эксперименты с интактным сердцем, показавшие, что у мышей с дефицитом GJA1-20k, подвергнутых I/ Травма R (рис. 5 E – L в исправленной рукописи).

Пересмотренная рукопись была изменена, чтобы включить указанные выше новые данные (рис. 5E–L и рис. 5 — дополнение к рисунку 1) и обсуждение:

— Раздел результатов

«Учитывая, что GJA1-20k представляет собой чувствительный к стрессу белок, который может опосредовать ишемическое прекондиционирование (Basheer, Fu et al., 2018) и для изучения защитных эффектов GJA1-20k от окислительного стресса мы измерили митохондриальную генерацию активных форм кислорода (АФК) в клетках HEK293 в условиях окислительного стресса, вызванного экзогенной обработкой h3O2. В не подвергнутых стрессу клетках присутствие GJA1-20k не влияет на образование митохондриальных АФК (рис. 5 — дополнение к рисунку 1D, E), тогда как в присутствии экзогенного h3O2 GJA1-20k предотвращает увеличение митохондриальных АФК (рис. 5 — дополнение к рисунку 1D). , Е). Таким образом, GJA1-20k, угнетающий митохондриальное дыхание в клетках, не подвергавшихся стрессу, не влияет на гомеостатическую выработку АФК, но оказывает благотворное влияние на снижение образования токсичных АФК во время стресса (рис. 5А, Б; рис. 5 — дополнение к рисунку 1Г, Д).Чтобы выяснить, обусловлены ли защитные эффекты экспрессией GJA1-20k или размером митохондрий, мы измерили АФК в клетках HEK293 с гиперэкспрессией DRP1 вместо гиперэкспрессии GJA1-20k. Сверхэкспрессия DRP1 уменьшилась в размере митохондрий, подобно GJA1-20k (рис. 5 — дополнение к рисунку 1F, G). Однако генерация АФК, индуцированная h3O2, была значительно повышена и выше, чем контроль GST под действием h3O2 (рис. 5 — дополнение к рисунку 1H, I). В совокупности сам GJA1-20k необходим для защитного деления митохондрий.

— Раздел обсуждения

«Индуцированное DRP1 деление и более мелкие митохондрии связаны с избыточной продукцией АФК, апоптозом и повреждением органов (Hu, Huang et al., 2017, Wang, Subramanian et al., 2017), что также видно на рисунке 5 — рисунок дополнение 1F-I, тогда как DRP1-независимое деление митохондрий наблюдалось в клетках, подвергшихся защитной митофагии (Stavru, Palmer et al., 2013, Yamashita, Jin et al., 2016, Coronado, Fajardo et al., 2018)».

— Раздел обсуждения

«Поскольку деление, вызванное GJA1-20k, связано с меньшей выработкой АФК при окислительном стрессе (рис. 5 — дополнение к рисунку 1D, E), эндогенное образование GJA1-20k и последующее снижение продукции АФК могут объяснить основное преимущество предварительного кондиционирования. .Следует отметить, что генетическая редукция GJA1-20k увеличивает размер инфаркта и выработку АФК после И/Р-повреждения (рис. 5E-H). Кроме того, популяция поврежденных митохондрий значительно увеличивается в сердце гетерозиготных мышей Gja1 M213L/WT после I/R (рис. 5I–L). Таким образом, снижение выработки АФК, вызванное GJA1-20k, может ограничивать степень повреждения И/Р, вызванного инфарктом миокарда».

3. В большинстве экспериментов на клеточном уровне используются клетки HEK293, и остается сомнительным, отражают ли они результаты кардиологических исследований in vivo.Поскольку система переноса аденовирусного гена в неонатальные кардиомиоциты выполняется на рисунке 1, лучше увидеть производство митохондриальных АФК в той же системе (рисунок 5E).

Это отличный комментарий рецензента, хотя мы должны подчеркнуть, что на исходном рисунке 1 мы выявили постоянное явление индуцированного GJA1-20k уменьшения митохондрий или увеличения размера митохондрий, вызванного удалением GJA1-20k, не только в клетках HEK293, но и в неонатальных кардиомиоцитах. , кардиомиоциты из сердец молодых взрослых мышей, а также из сердец взрослых мышей.Что касается образования митохондриальных АФК, то известно, что изолированные неонатальные кардиомиоциты трудно индуцировать митохондриальные АФК (Kang et al. , Circ Res. , 2000). Поэтому, чтобы решить проблему рецензента по поводу физиологической значимости, мы использовали ткань сердца взрослых мышей после травмы I / R и измерили продукцию АФК. Как видно на новых панелях G и H на фиг. 5, в сердцах взрослых гетерозиготных (Gja1 M213L/WT ) мышей наблюдается увеличение продукции АФК после I/R-повреждения по сравнению с сердцами животных дикого типа.Более того, в нашем предыдущем исследовании (Basheer et al. , JCI Insight , 2018, Figure 7E, F) AAV9-трансдуцированные GJA1-20k со сверхэкспрессией взрослых кардиомиоцитов снижали выработку АФК. Взятые вместе, измерения АФК с использованием клеток HEK293 в настоящей рукописи согласуются с новыми результатами исследования сердца взрослого человека ex vivo.

Пересмотренная рукопись была изменена, чтобы включить вышеуказанные новые данные (рис. 5G, H) и обсуждение:

— Раздел результатов

«Однако примечательно, что сниженная экспрессия GJA1-20k приводит к почти полному инфаркту миокарда после И/Р-повреждения (рис. 5E, F).Более того, продукция АФК после травмы I/R была увеличена у мышей Gja1 M213L/WT по сравнению с мышами WT после I/R (рис. 5G, H). Не было существенной разницы в размере митохондрий в исходном состоянии между взрослыми КМ мышей WT и Gja1 M213L/WT , как и в случае неонатальных КМ (рис. 5I, J), тогда как размер митохондрий значительно увеличивался после повреждения I/R и гетерозиготных мышей. Мыши Gja1 M213L/WT имели более крупные митохондрии по сравнению с мышами WT после I/R (рис. 5I, J).Интересно, что площадь митохондриального матрикса также была увеличена, что свидетельствует о потере крист в сердце мышей Gja1 M213L/WT (рис. 5K, L). Эти данные показывают, что даже частичная делеция GJA1-20k приводит к серьезному нарушению ответа на ишемический стресс».

— Раздел обсуждения

«Поскольку деление, вызванное GJA1-20k, связано с меньшей выработкой АФК при окислительном стрессе (рис. 5 — дополнение к рисунку 1D, E), эндогенное образование GJA1-20k и последующее снижение продукции АФК могут объяснить основное преимущество предварительного кондиционирования. .Следует отметить, что генетическая редукция GJA1-20k увеличивает размер инфаркта и выработку АФК после И/Р-повреждения (рис. 5E-H). Кроме того, популяция поврежденных митохондрий значительно увеличивается в сердце гетерозиготных мышей Gja1 M213L/WT после I/R (рис. 5I–L). Таким образом, снижение выработки АФК, вызванное GJA1-20k, может ограничивать степень повреждения И/Р, вызванного инфарктом миокарда».

4. Влияет ли сверхэкспрессия GJA1-20k на потенциал митохондриальной мембраны и способность продуцировать АТФ? Удаляются ли митохондрии, которые делятся с помощью GJA1-20k, посредством митофагии?

Мы ценим отличные предложения Рецензента.Чтобы решить эти проблемы, мы проанализировали потенциал митохондриальной мембраны (измеряемый по интенсивности TMRE), продукцию АТФ и митофагию (измеряемую по интенсивности LC3). Как видно из нового рисунка 1 — дополнение к рисунку 2, экспрессия GJA1-20k или его гомозиготное удаление не изменяет мембранный потенциал, продукцию АТФ или митофагию.

Пересмотренная рукопись была изменена, чтобы включить вышеуказанные новые данные (рисунок 1 — дополнение к рисунку 2) и обсуждение:

— Раздел результатов

«Ранее мы сообщали, что GJA1-20k участвует в митохондриальном биогенезе (Basheer, Fu et al., 2018). В соответствии с нашим предыдущим исследованием, взрослые кардиомиоциты, трансдуцированные AAV9, показали увеличенное количество копий митохондриальной ДНК, а мыши с дефицитом GJA1-20k (Gja1M213L/M213L) уменьшили количество копий. Однако экзогенный GJA1-20k не изменял митохондриальный биогенез в клетках HEK293. Экзогенный GJA1-20k также не влиял на мембранный потенциал или базовую продукцию АТФ (рис. 1 — дополнение к рисунку 2A–C). В дополнение к количеству копий митохондриальной ДНК, ни маркеры белков биогенеза, ни маркеры митофагии не были изменены ни в клетках HEK293, трансфицированных GJA1-20k, ни в сердцах мышей Gja1 M213L/M213L (рис. 1 – дополнение к рисунку 2D – G).

— Раздел обсуждения

«Однако присутствие GJA1-20k, индуцируя деление митохондрий и более мелких митохондрий (рис. 1, 3 и 4), не снижает ни MFN1, ни MFN2, не активирует DRP1, не изменяет мембранный потенциал, продукцию АТФ, митохондриальный биогенез или митофагию ( Рисунок 2; Рисунок 1 — приложение к рисунку 2)».

5. Я хотел бы уточнить, насколько это GJA1-20k-зависимое деление митохондрий способствует патологическому делению митохондрий при гипоксии/реоксигенации, которое может быть отделено от Drp1-зависимого деления митохондрий.Рисунок 5—приложение к рисунку 1 сравнивает митохондрии WT и Gja1M213L/WT в физиологическом состоянии.

Мы высоко ценим отличное предложение рецензента. В том же протоколе для ответа на пункт № 3 выше мы подвергли сердца взрослых WT и Gja1 M213L/WT И/Р-повреждению ex-vivo, а затем использовали электронную микроскопию для оценки митохондриальных различий. В соответствии с предыдущими исследованиями (Allen et al. , Commun Biol , 2020), острое повреждение I/R вызывало митохондриальный отек как в сердцах WT, так и в Gja M213L/WT .Однако в сердцах Gja1 M213L/WT наблюдалось большее увеличение митохондриального набухания по сравнению с WT после I/R (рис. 5I, J). Кроме того, сердца Gja1 M213L/WT имели увеличенную площадь матрикса митохондрий (т.е. меньше крист), что указывает на дополнительную хрупкость митохондрий из сердец Gja1 M231L/WT (рис. 5I, K и L). Эти данные подтверждают предыдущие результаты окрашивания TTC (рис. 5E, F), необходимость GJA1-20k для кардиозащиты от острого повреждения I/R.

Пересмотренная рукопись была изменена, чтобы включить указанные выше новые данные (рис. 5I–L) и обсуждение:

— Раздел результатов

«Не было существенной разницы в размере митохондрий в исходном состоянии между WT и Gja1 M213L/WT мышей взрослых CMs, как и у новорожденных CMs (рис. 5I, J), тогда как размер митохондрий был значительно увеличен после I/R повреждения и гетерозиготные мыши Gja1 M213L/WT имели более крупные митохондрии по сравнению с мышами дикого типа после I/R (рис. 5I, J).Интересно, что площадь митохондриального матрикса также была увеличена, что свидетельствует о потере крист в сердце мышей Gja1 M213L/WT (рис. 5K, L). Эти данные показывают, что даже частичная делеция GJA1-20k приводит к серьезному нарушению ответа на ишемический стресс».

— Раздел обсуждения

«Поскольку деление, вызванное GJA1-20k, связано с меньшей выработкой АФК при окислительном стрессе (рис. 5 — дополнение к рисунку 1D, E), эндогенное образование GJA1-20k и последующее снижение продукции АФК могут объяснить основное преимущество предварительного кондиционирования. .Следует отметить, что генетическая редукция GJA1-20k увеличивает размер инфаркта и выработку АФК после И/Р-повреждения (рис. 5E-H). Кроме того, популяция поврежденных митохондрий значительно увеличивается в сердце гетерозиготных мышей Gja1 M213L/WT после I/R (рис. 5I–L). Таким образом, снижение выработки АФК, вызванное GJA1-20k, может ограничивать степень повреждения И/Р, вызванного инфарктом миокарда».

Рецензент №2 (Рекомендации авторам):

Следующая рукопись Shimura et al., стремится исследовать роль изоформы белка Cx43 массой 20 кДа (GJA1-20k) в ишемическом предварительном кондиционировании. Авторы обнаружили, что GJA1-20K может обеспечивать защиту в ишемическом сердце посредством полимеризации актина вокруг митохондрий и индукции митохондриального деления. С помощью серии элегантных генетических, химических, биохимических и клеточно-биологических исследований, включая использование мышиной линии Gja1 M213L, созданной этой группой, авторы определили, что положительный эффект GJA1-20K был обусловлен снижением количества активных форм кислорода (АФК). ) генерация из более мелких митохондрий.В целом, исследования являются хорошим продолжением опубликованной работы этой группы, которая первоначально обнаружила, что широкий спектр изоформ белка Cx43 может быть получен из внутренних сайтов инициации трансляции в этом белке. В частности, это исследование теперь дополнительно изучает специфическую роль GJA1-20K в сердце и обнаруживает, что он играет критическую роль в ишемическом прекондиционировании, влияя на размер митохондрий и продукцию АФК. Хотя работа сделана хорошо, есть некоторые нерешенные вопросы, которые авторам следует решить.Было бы полезно, если бы авторы подробнее обсудили значение изоформы GJA1-20K в качестве терапии, поскольку работа с AAV9 предполагает возможность генной терапии в будущем. Остается неясным, как авторы представляют себе такой сценарий.

Мы согласны с рецензентом в том, что опосредованная AAV9 кардиопротекция ожидаемой ишемии была бы естественным продолжением нашей работы. Кроме того, следует учитывать доставку генов в другие чувствительные к ишемии органы, такие как почки и головной мозг.Существует также возможность доставки пептида GJA1-20k остро. В неопубликованных предварительных исследованиях мы обнаружили, что пептид GJA1-20k в культуре способен пересекать клеточную мембрану, проникать в клетки и повышать устойчивость клеток к окислительному и флуоресцентному повреждению. Кроме того, в модели гиповолемического шока у крупных животных (свиней) мы обнаружили, что внутривенная инъекция GJA1-20k защищает от экспериментально индуцированной сердечной ишемии. Пересмотренная рукопись была изменена, чтобы включить это обсуждение:

— Раздел обсуждения

«Крупные сердечно-сосудистые процедуры связаны с низким потоком и связанным с ишемией повреждением конечных органов, таких как сердце, почки и мозг.Априорно опосредованная генной терапией доставка GJA1-20k в эти органы может быть полезной. Например, чрескожные коронарные вмешательства связаны с повреждением как сердца, так и почек (Brown, Malenka et al., 2008, Tricoci, Newby et al., 2018) и могут получить пользу от индуцированной GJA1-20k защиты. Точно так же коронарное шунтирование с сердечно-легочным шунтированием связано с повреждением головного мозга и почек с низким потоком (Roach, Kanchuger et al., 1996, McKhann, Grega et al., 2006, O’Neal, Shaw et al., 2016), а операции на брюшной аорте связаны с повреждением почек, и все они могут получить пользу от предварительного лечения GJA1-20k, опосредованного вирусом.

Также возможно, согласно неопубликованным предварительным исследованиям нашей группы, что введение пептида GJA1-20k внутривенно может получить доступ к внутриклеточной среде сердца и других органов. В этом сценарии введение GJA1-20k может происходить за несколько минут или часов до ишемического инсульта, а не предположительно за несколько дней или недель, которые потребуются для опосредованного вирусом введения.Будущие исследования будут сосредоточены на остром внутривенном введении пептида GJA1-20k субъектам, которым грозит ожидаемая ишемия».

Было бы полезно дополнительное обсуждение того, как более мелкие митохондрии из GJA1-20K сверхэкспрессии могут влиять на кардиомиоциты и общую функцию сердца, особенно после ишемии или инфаркта. Хотя GJA1-20K может уменьшить размер инфаркта, может ли это быть за счет общей сердечной функции или резерва?

Ни гиперэкспрессия GJA1-20k, опосредованная вирусом, ни развитие линии мышей, которые снижают инициацию внутренней трансляции GJA1-20k, не приводят к значительному изменению сердечной функции (Basheer et al., JCI обзор , 2018; Сяо и др. , J Clin Invest , 2020). Однако, как предполагает рецензент, однократное введение более высокой дозы GJA1-20k все же может привести к снижению функции. На самом деле, как мы обнаружили ранее (Basheer et al. , JCI Insight , 2018), GJA1-20k реагирует на стресс и может опосредовать постишемическое оглушение сердца, которое характеризуется жизнеспособным, но плохо функционирующим миокардом после ишемии. оскорблять. Пересмотренная рукопись была изменена, чтобы включить это обсуждение:

— Раздел обсуждения

«Мы обнаружили, что ни экзогенная гиперэкспрессия GJA1-20k в сердце мыши, ни GJA1-20kM213L/WT взрослых мышей не изменяют функцию сердца без стресса (Basheer, Fu et al., 2018 г., Сяо, Шимура и др., 2020 г.). Однако однократное введение GJA1-20k или использование GJA1-20k в контексте стрессового миокарда может привести к снижению сердечной функции. Поскольку GJA1-20k чувствителен к стрессу, увеличение GJA1-20k может быть медиатором постишемической защиты (Basheer, Fu et al., 2018) и даже отвечать за феномен оглушения миокарда, который связан с малым митохондрии (Borgers, Thone et al., 1993, Borgers 2002). С др. стороны, GJA1-20k индуцирует функциональную гибернацию стрессированного миокарда, повышая выживаемость, но предположительно может приводить к снижению сердечной функции.Если GJA1-20k действительно вызывает острую сердечную депрессивную реакцию, потребуются соответствующие шаги для компенсации более низкого сердечного выброса в течение периода защиты миокарда».

Рецензент №3 (Рекомендации авторам):

1. Каковы уровни гиперэкспрессии GJA1-20k у expt? Сопоставимо ли оно с тем, что было описано для эндогенного увеличения, наблюдаемого при стрессе кардиомиоцитов?

Мы ценим ценный вопрос Рецензента №3.В настоящем исследовании экзогенная плазмидная трансфекция экспрессирует примерно в 5,6 раз больше GJA1-20k по сравнению с эндогенной (см. изображение ответа автора 1). Наше предыдущее исследование выявило примерно 1,5-кратное, 6,0-кратное и 2,0-кратное увеличение экспрессии GJA1-20k при I/R-повреждении мыши, подострой ишемической кардиомиопатии мыши и терминальной стадии ишемической кардиомиопатии человека соответственно (рис. 1 и 2 в исследовании Basheer). и др. , JCI обзор , 2018). Таким образом, наши данные о клеточных линиях применимы для исследования сверхэкспрессии GJA1-20k, особенно для острых эффектов.

Количественная оценка экзогенной экспрессии GJA1-20k в клетках HEK293.

(A) Репрезентативное изображение мембраны вестерн-блоттинга из клеток, трансфицированных GJA1-20k, меченных GFP. (B и C) Количественная оценка интенсивности полосы между эндогенным и экзогенным GJA1-20k. Графики были выражены как среднее значение ± стандартное отклонение.

2.Есть ли разница при сравнении митохондрий в SSM и IFM? Обе популяции затронуты?

Мы благодарим рецензента за этот прекрасный вопрос. При рассмотрении наших данных ЭМ у нас нет разрешения или изображений иммунозолота более старых высокоорганизованных сердец мышей, чтобы позволить точное количественное сравнение между митохондриями SSM и IFM. Это важный вопрос, который мы должны рассмотреть для будущего тщательного исследования, посвященного этому вопросу, и ценим проницательность рецензента, указывающего на это направление.

3. Пептид 20 кДа содержит некоторую последовательность ТМ, так почему же он не нацелен на ПМ? МТС есть? Схема в начале текста поможет сориентировать читателя — аналогично тому, что было показано в предыдущих статьях.

Мы ценим этот важный вопрос от рецензента. Поиском in silico мы не смогли идентифицировать MTS в GJA1-20k. Имеются сообщения о том, что Hsp90 помогает нацеливать Cx43 на митохондриальную мембрану (Rodriguez-Sinovas et al. , Circ Res., 2006 г.; и Родригес-Синовас и др. , Биохим Биофиз Акта Биомем. , 2018), что согласуется с локализацией GJA-20k в митохондриях во время стресса. Как мы подчеркивали ранее, предыдущие сообщения о локализации Cx43 с помощью иммуноцитохимии могли на самом деле идентифицировать GJA1-20k, а не полноразмерный Cx43, поскольку эпитоп большинства анти-Cx43 антител находится на С-конце и также будет идентифицировать GJA1-20k. Поскольку GJA1-20k является гидрофильным и не существует в виде связанных с мембраной гексамеров, таких как Cx43, GJA1-20k не требует доставки к плазматической мембране на основе везикул и, следовательно, более доступен для прикрепления к внутриклеточным органеллам, таким как митохондрии.

Приносим свои извинения, но нам нужны пояснения по запросу рецензента о схеме, приведенной ранее в тексте. Должна ли наша общая схема (рис. 6 в исправленной рукописи) появиться раньше, или рецензент предлагает конкретную пояснительную схему и/или последовательность GJA1-20k, которая представлена ​​ранее, чтобы читатели могли отличить GJA1-20k от полноразмерных полуканалов Cx43?

4. Фосфорилирование S616 не изменилось, но почему бы не проверить S637? Этот сайт считается основным фактором активации/деактивации Drp1.Таким образом, изменения в статусе фосфорилирования в положении 637 имеют решающее значение для обеспечения полной оценки регуляции Drp1 PTM.

Мы признательны Рецензенту №3 за вдумчивый комментарий. Мы дополнительно проанализировали экспрессию фосфо-DRP1 (S637) и не обнаружили изменений в экспрессии (рис. 2A, B в пересмотренной рукописи).

Пересмотренная рукопись была изменена, чтобы включить вышеуказанные новые данные (рис. 2A, B):

— Раздел результатов

«DRP1 потенцируется фосфорилированием его серина 616 и 637 (Sabouny and Shutt 2020).Мы проверили содержание общего DRP1 и фосфорилированного DRP1 в клетках HEK293, трансфицированных GJA1-20k, и не обнаружили существенной разницы ни в уровнях белка общего DRP1, DRP1-pS616, -pS637, ни в соотношении (pS616/всего) (рис. 2А, Б). Уровни MFN1 и MFN2 и митохондриального маркерного белка TOM20, маркера клеточного митохондриального содержимого, также не изменились (рис. 2А, В)».

5. Изменяется ли локализация Drp1 при гиперэкспрессии GJA1-20k? Трудно сказать по дополнительным рисункам Нет количественной оценки.

Мы ценим ценный вопрос Рецензента №3. Чтобы решить эту проблему, мы количественно определили количество митохондрий, связанных с DRP1. Как показано на рисунке 2 — дополнение к рисунку 1C, не было существенной разницы в локализации DRP1 в митохондриях между контролем GST и группой, трансфицированной GJA1-20k.

Пересмотренная рукопись была изменена, чтобы включить указанные выше новые данные (рис. 2 — дополнение к рисунку 1C).

6. На рисунке 5 данные Seahorse показывают более высокий уровень немитохондриального дыхания в образцах животных.Эта разница также сглаживает различия в базальном дыхании, утечке и максимальном дыхании. В данных определенно есть тенденция, но различия не столь убедительны, если принять во внимание немитохондриальное дыхание (если только я что-то не упустил в том, как представлены данные).

Мы хотели бы поблагодарить Рецензента №3 за указание на это. Как указывает рецензент, немитохондриальное дыхание повышено в сердцах мышей с мутацией GJA1. В исправленной рукописи мы приводим гистограммы с указанием каждого параметра OCR (рис. 5 — дополнение к рисунку 1C).Для расчета этих параметров вычитали немитохондриальное дыхание (третья точка измерения R/A-обработки). Данные подтверждают увеличение максимального дыхания у мышей Gja1 M213L/M213L .

Чтобы прояснить этот момент, мы обновили раздел «Методы»:

— Раздел методов

«Для базального дыхания мы рассчитали разницу между третьим измерением во время фазы до введения олигомицина и третьим измерением после Р/А. Для утечки протонов мы рассчитали разницу между третьим измерением после введения олигомицина и третьим измерением после Р/А.Для максимального дыхания мы рассчитали разницу между третьим измерением после FCCP и третьим измерением после R/A. Для АТФ-связанного дыхания мы рассчитали разницу между третьим измерением во время фазы до олигомицина и третьим измерением после олигомицина. Для резервной емкости мы рассчитали разницу между третьим измерением во время фазы после FCCP и третьим измерением в фазе до олигомицина. Для немитохондриального дыхания мы использовали значение третьего измерения после R/A.

Кроме того, пересмотренная рукопись была изменена, чтобы включить указанные выше новые данные (рис. 5C, D; рис. 5 — дополнение к рисунку 1A, B):

— Раздел результатов

«Аналогично, максимальное дыхание повышено у новорожденных CM, полученных от мышей Gja1 M213L/M213L с дефицитом GJA1-20k, а максимальное дыхание для гетерозиготных мышей Gja1 M213L/WT находится между таковым у мышей WT и Gja1 M213L/9M213L (рис. 5В, Г; рисунок 5 — дополнение к рисунку 1А, Б). Кроме того, наблюдая за другими параметрами OCR, мы обнаружили снижение АТФ-связанного дыхания и резервной емкости в кардиомиоцитах Gja1 M213L/WT , а также увеличение утечки протонов и немитохондриального дыхания в Gja1 M213L/M213L , что свидетельствует о наличии могут быть компенсаторными длительными эффектами мутации Gja1 (рис. 5—дополнение к рисунку 1С).

7. ИМО, обсуждение немного длинное и извилистое. Некоторые из них необходимы, но я думаю, что их можно организовать более эффективно, чтобы лучше подчеркнуть влияние ваших выводов.

Мы признательны Рецензенту №3 за вдумчивый комментарий. В исходную рукопись и особенно в исправленную рукопись мы включили текст для ответов на возможные вопросы от самых разных читателей, от динамики цитоскелета до ишемического прекондиционирования. Мы по-прежнему пытались сделать обсуждение связным, но не должны были быть слишком содержательными за счет решения вопроса, важного для конкретного рецензента или читателя.

8. Опечатка в строке 45… «stress sFriedman and».

Мы благодарим рецензента за указание на это. Мы исправили опечатку.

https://doi.org/10.7554/eLife.69207.sa2

Совет дня: 20 000 шагов

Ходьба — отличное упражнение, которое может делать каждый, которое может быть очень полезным для здоровья и в то же время легко выполняться. Мы делаем это каждый день в качестве нашего основного вида транспорта, и только благодаря этому уже можно ощутить преимущества хороших упражнений.

В наши дни очень популярны шагомеры, с помощью которых люди могут легко отслеживать количество пройденных ими шагов, привязав устройство к своей обуви и прогуливаясь по тротуару в целях сохранения здоровья. Большинство людей хотели бы пройти 20 000 шагов в рамках своей ежедневной цели для здоровья, но какая конкретно от этого польза?

Хиропрактик Top Vacaville объясняет, как ежедневная прогулка по 20 000 шагов может зависеть от многих личных факторов. Ваша скорость, шаг и общее состояние здоровья могут повлиять на то, какую пользу вы от этого получите.Но в целом любая ходьба уже пойдет вам на пользу независимо от того, как далеко вы собираетесь пройти.


Vacaville Chiropractor обеспечивает преимущества ходьбы в 20 тысяч шагов

Если подумать, то ходьба на 20 000 шагов означает, что вы уже проделали довольно большой путь. 20 000 шагов могут означать, что вы проехали около 15,2 км! Некоторым людям это может показаться нереальным, учитывая расстояние, необходимое для его достижения. Несмотря на сложность, на самом деле есть люди, которые занимаются этим ежедневно.Итак, если вы планируете делать это самостоятельно, какие преимущества вы получите, если будете больше ходить пешком?

Улучшение сердечно-сосудистой системы

Когда вы ходите пешком, вы оказываете большую пользу своей сердечно-сосудистой системе. Люди, которые испытывают некоторые проблемы с сердцем, могут получить некоторую пользу от ходьбы на большие расстояния. Вы можете исправить некоторые сердечно-сосудистые проблемы, просто прогуливаясь. Это упражнение повысит частоту сердечных сокращений, тем самым улучшив сердечно-сосудистую систему.Так что порадуйте свое сердце, выполнив это упражнение, и сосредоточьтесь на ежедневном увеличении дистанции.

Сжигайте калории и худейте

Во время ходьбы вы сжигаете лишние калории, углеводы и жиры. Ваш темп может повлиять на то, сколько калорий вы собираетесь сжечь.

Если вы занимаетесь физическими упражнениями, это уже может принести пользу вашему здоровью и физической форме. Когда вы ходите, бегаете трусцой или пробегаете 20 000 шагов, вы сжигаете много калорий, которые вы потребляете.

Количество калорий, сжигаемых людьми, происходит с разной скоростью. Это связано с тем, что физическая активность зависит от возраста, роста, веса, интенсивности и физического состояния человека. Например, человек, проходящий 3 мили менее чем за час, уже сжег больше калорий, чем человек, который делает это всего за 45 минут.

Итак, большой вопрос: «Сколько шагов вам нужно, чтобы похудеть?» Ну, это также зависит от того, какую пищу вы едите. Даже если вы прошли 20 000 шагов и сразу после этого съели половину шоколадного чизкейка, не ждите, что ваш вес изменится в любой момент.Чтобы извлечь из этого пользу, обязательно следите за размерами своих порций, чтобы ходьба действительно давала вам возможность похудеть.

Улучшает обмен веществ

Согласно исследованиям, более частые прогулки улучшают обмен веществ в организме. Но обратите внимание, что это не позволяет вам съесть коробку кексов после часа ходьбы. Тем не менее, способ обработки пищи вашим телом может улучшиться. Просто не злоупотребляйте этим преимуществом, особенно если вы хотите оставаться в форме.

Повышает вычислительную мощность мозга

Если вы хотите увеличить мощность своего мозга, регулярно совершайте прогулки и убедитесь, что вы потеете, выполняя эту деятельность. В целом, любые упражнения могут принести пользу развитию вашего мозга, особенно у молодых людей.

Большинство людей начинают свое утро с тренировки. Это помогает улучшить их общее самочувствие, становясь более рациональными, бдительными и сосредоточенными на своих проектах.Это может даже повысить вашу производительность, что может быть хорошо, если у вас будет много дел на работе позже.

Причина этого в том, что в мозг поступает больше крови и кислорода, что благотворно влияет на его работу.

Несмотря на то, что некоторые улучшения могут быть достигнуты в результате интенсивных тренировок, более частая ходьба также может принести пользу аналогичным образом.

Поднимает настроение

Ходьба может улучшить умственные способности вашего тела, и одним из них является повышение вычислительной мощности мозга.Любая форма физической активности также может улучшить ваше общее настроение. Причина этого в том, что эндорфины вырабатываются в вашем организме как сумасшедшие. Таким образом, чем больше усилий вы прикладываете к своей физической активности, тем больше вырабатывается гормонов.

Станьте первым комментатором

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.